Die unten aufgeführten ELISA-Probenentnahme und -speicherung sind als allgemeine Richtlinien gedacht. Spezifische Protokolle können je nach Zelllinie oder Gewebetyp variieren. Wenn Proben für längere Zeit gelagert werden, wird empfohlen, die Stabilität der Probe zu testen. Vermeiden Sie wiederholte Einfrier-Tau-Zyklen für alle Probentypen.
Serum
Verwenden Sie ein Serum-Separatormuster (SST) und lassen Sie Proben bei Raumtemperatur 30 Minuten lang gerinnen, bevor Sie sie für 15 Minuten bei 1000 x g zentrifugieren. Nehmen Sie das Serum auf und testen Sie es sofort oder portionieren und lagern Sie die Proben bei ≤ -20 °C.
Plasma
Sammeln Sie Plasma unter Verwendung von EDTA, Heparin oder Citrat als Antikoagulans. Zentrifugieren Sie für 15 Minuten bei 1000 x g innerhalb von 30 Minuten nach der Entnahme. Testen Sie es sofort oder portionieren und lagern Sie die Proben bei ≤ -20 °C.
Plättchenarmes Plasma
Sammeln Sie Plasma unter Verwendung von EDTA, Heparin oder Citrat als Antikoagulans. Zentrifugieren Sie für 15 Minuten bei 1000 x g innerhalb von 30 Minuten nach der Entnahme. Ein zusätzlicher Zentrifugationsschritt des Plasmas bei 10.000 x g für 10 Minuten bei 2-8 °C wird empfohlen, um eine vollständige Plättchenentfernung zu erreichen. Testen Sie es sofort oder portionieren und lagern Sie die Proben bei ≤ -20 °C.
Zellkultur-Supernate
Entfernen Sie Partikel durch Zentrifugation bei 500 x g für 5 Minuten. Nehmen Sie das Supernatant auf und testen Sie es sofort oder portionieren und lagern Sie die Proben bei ≤ -20 °C.
Gewebsmischungen
Die Zubereitung von Gewebemischungen wird je nach Gewebetyp variieren. Spülen Sie das Gewebe mit 1X PBS, um überschüssiges Blut zu entfernen, mischen Sie es in 20 mL 1X PBS und lagern Sie es über Nacht bei ≤ -20 °C. Nach zwei Einfrier-Tau-Zyklen wurden die Zellmembranen aufbrechen, wurden die Mischungen für 5 Minuten bei 5000 x g zentrifugiert. Das Supernatant wurde sofort entfernt und getestet. Alternativ können Proben portioniert und bei ≤ -20 °C gelagert werden.
Zelllysate
Lösen Sie die Zellen im Lysat-Puffer auf und lassen Sie sie 30 Minuten lang am Eis sitzen. Zentrifugieren Sie Röhrchen bei 14.000 x g für 5 Minuten, um unlösliches Material zu entfernen. Portionieren Sie das Supernatant in ein neues Röhrchen und werfen Sie den restlichen gesamten Zellauszug weg. Bestimmen Sie die Gesamtproteinkonzentration unter Verwendung eines Gesamtprotein-Assays. Testen Sie es sofort oder portionieren und lagern Sie bei ≤ -20 °C.
Gewebe-Lysate
Spülen Sie das Gewebe mit PBS, schneiden Sie es in 1-2 mm Stücke und mischen Sie es mit einem Gewebemischer in PBS. Fügen Sie ein gleiches Volumen an RIPA-Puffer hinzu, der Protease-Inhibitoren enthält, und lyseieren Sie die Gewebe bei Raumtemperatur für 30 Minuten mit sanfter Agitation. Zentrifugieren Sie, um Ablagerungen zu entfernen. Bestimmen Sie die Gesamtproteinkonzentration unter Verwendung eines Gesamtprotein-Assays. Testen Sie es sofort oder portionieren und lagern Sie bei ≤ -20 °C.
Speichel
Sammeln Sie Speichel in einem Röhrchen und zentrifugieren Sie für 5 Minuten bei 10.000 x g. Sammeln Sie die wässrige Schicht, testen Sie es sofort oder portionieren und lagern Sie die Proben bei ≤ -20 °C.
Urin
Sammeln Sie aseptisch den ersten Urin des Tages (Mittelfluss), der direkt in einen sterilen Behälter entleert wird. Zentrifugieren Sie, um Partikelstoffe zu entfernen. Testen Sie es sofort oder portionieren und lagern Sie die Proben bei ≤ -20 °C.
Menschliche Milch
Zentrifugieren Sie für 15 Minuten bei 1000 x g bei 2-8 °C. Sammeln Sie den wässrigen Anteil und wiederholen Sie diesen Prozess insgesamt 3-mal. Testen Sie es sofort oder portionieren und lagern Sie die Proben bei ≤ -20 °C.
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