Protocols

Westliche Blot-Tesierung; Lyse-Buffer; Elektrophorese zugehörige Reagenzien; SDS-PAGE

Western Blotting ist eine weit verbreitete immunologische Methode zur Detektion spezifischer Proteine in komplexen Mischungen. Sie vereint die Trennungskraft der Gelsäure-Elektrophorese mit der Spezifität von Antikörpern. Der Prozess beginnt mit der Extraktion des Proteins aus Zellen oder Geweben, gefolgt von der Trennung mittels SDS-PAGE nach molekularem Gewicht. Anschließend werden die Proteine auf eine Membran übertragen (typischerweise Nitrocellulose oder PVDF) und mit spezifischen Antikörpern detektiert. Das primäre Antikörper bindet an das Zielprotein, während das sekundäre Antikörper, gekoppelt an ein reportierendes Enzym, eine Visualisierung durch chemilumineszentische, fluoreszierende oder farbstabile Detektionsverfahren ermöglicht.

Western Bloting (auch Immunoblotting genannt) ist eine Technik zur Analyse einzelner Proteine in einer Proteinkonzentration (z.B. eines Zelllyasats). Bei Western Bloting wird die Proteinkonzentration auf einen Gelspeicher übertragen (SDS-PAGE, Native PAGE, isoelektrische Fokussierung, 2D-Gel-Electrophoresis usw.), um die Proteine nach Größe, Ladung oder anderen Unterschieden in den einzelnen Proteingläichen zu sortieren.