Western Blot Gemeinsame Reagenzformulierungen-EnkiLife-Recombinant Proteins,Antibodies,Kits,Cell Biology

Häufige Western Blot-Rezeptur

Lysierungs-Puffer Pufferherstellung Elektrophorese Übertragung Blockierungslösungen

Häufige Lysierungs-Puffer-Rezepturen

Zytoskelett-bindendes Protein-Extraktionspuffer

Zum Extrahieren von zytoskelett-bindenden Proteinen

Tris, pH 7.4 10 mM

NaCl 100 mM

EDTA 1 mM

EGTA 1 mM

NaF 1 mM

Na₄P₂O₇ 20 mM

Na₃VO₄ 2 mM

Triton X-100 1%

Glycerol 10%

SDS 0.1%

Natriumdeoxycholat 0.5%

Lösliches Protein-Puffer

Zum Extrahieren löslicher Proteine

Tris-HCl, pH 7.5 20 mM

EGTA (Ca²⁺-Chelator) 1 mM

RIPA-Lysierungs-Puffer

Geeignet zur Zerstörung der Kernmembran zum Extrahieren von Kernproteinen

Tris HCl, pH 8 50 mM

NaCl 150 mM

NP-40 1%

Natriumdeoxycholat 0.5%

SDS 0.1%

Enthält das ionische Detergens Natriumdeoxycholat, geeignet für die Zerstörung der Kernmembran zum Extrahieren von Kernproteinen. Kann Kinasen denaturieren und Protein-Interaktionen stören.

NP-40-Lysierungs-Puffer

Sanfter Lysierungs-Puffer-Rezeptur

Tris HCl, pH 8 20 mM

NaCl 137 mM

Glycerol 10%

NP-40 1%

EDTA 2 mM

Häufige Reagenzien-Herstellungsverfahren

100 mM EDTA-Lösung

EDTA-Lösungs-Herstellung

EDTA 1.86g

Ultrapures Wasser 40ml

NaOH pH auf 7.4 einstellen

Auf Vollmenge bringen 50ml

Lagerungsbedingung 4℃

10×TBS-Konzentrat

TBS-Pufferkonzentrat

Trizma HCl 24.23 g

NaCl 80.06 g

pH-Einstellung 7.6 (HCl)

Auf Vollmenge bringen 1L ddH₂O

TBST-Arbeitslösung (1L)

Wasch-Puffer

10×TBS 100 ml

Ultrapures Wasser 900 ml

Tween20 1 ml

Phosphatase-Inhibitoren-Lösung

Verhindert Protein-Dephosphorylierung

Natriumorthovanadat 100mM

Lösungsmittel Doppelt destilliertes Wasser

pH-Einstellung 9.0 (HCl)

Behandlung Kochen bis farblos

Lagerungsbedingung -20℃

In einem Abzug durchführen, während des Kochens abdecken um Verdampfung zu verhindern, entsorgen wenn Lösung gelb wird. Übliche Arbeitskonzentration liegt im Bereich 1-10 mM.

Sanftes Stripping-Puffer (1L)

Membran-Regenerations-Puffer

Glycin 15 g

SDS 1 g

Tween20 10 ml

pH 2.2

Lösungsmittel Ultrapures Wasser bis 1L

Starkes Stripping-Puffer (100ml)

Starker Membran-Regenerations-Puffer

10% SDS 20 ml

0.5M Tris HCl pH 6.8 12.5 ml

Ultrapures Wasser 67.5 ml

β-Mercaptoethanol 0.8 ml

In einem Abzug durchführen

Antikörper-Verdünnungspuffer

Zum Verdünnen von primären oder sekundären Antikörpern

Normales Serum 100 µl

BSA 10 mg

TBS 900 µl

Carbonat-Beschichtungspuffer (100mM, pH 9.6)

Beschichtungspuffer für ELISA-Experimente

Na₂CO₃ 3.03 g

NaHCO₃ 6.0 g

Lösungsmittel Ultrapures Wasser bis 1L

PBS (pH 7.4, 500ml)

Phosphat-Pufferes Salin

Na₂HPO₄ 1.16 g

KCl 0.1 g

KH₂PO₄ 0.1 g

NaCl 4 g

1 M Tris-HCl，pH 7.6

Tris-Puffer

Tris-Basis 12.11 g

ddH2O 80 mL

pH-Einstellung 7.6 (HCl)

Auf Vollmenge bringen 100mL ddH2O

0.5 M Tris-HCl，pH 6.8

Tris-Puffer

Tris-Basis 6.06 g

ddH2O 60 mL

pH-Einstellung 6.8 (HCl)

Auf Vollmenge bringen 100mL ddH2O

10% SDS

Natrium-Dodecyl-Sulfat-Lösung

SDS 1g

ddH2O 10mL

1.0% Bromphenolblau

Elektrophorese-Indikator

Bromphenolblau 100mg

ddH2O 10mL

Elektrophorese-bezogene Reagenzien

SDS-Lade-Puffer (2X)

Zum Laden für SDS-PAGE

0.5 M Tris-HCl，pH 6.8 2.5ml

Glycerol 2ml

10%SDS 4ml

0.1% Bromphenolblau 0.5ml

ddH2O bis 10mL

LDS-Lade-Puffer (4X)

Zum Laden für LDS-PAGE

Tris HCl 0.666g

Tris-Basis 0.682g

LDS 0.8g

EDTA 0.006g

Glycerol 4g

SERVA Blue G250 (1% Lösung) 0.75ml

Phenolrot (1% Lösung) 0.25ml

ddH2O bis 10ml

Tris-Glycin SDS-Elektrophorese-Puffer (10X)

SDS-PAGE Elektrophorese-Puffer

Tris-Basis 29g

Glycin 144g

SDS 10g

ddH2O bis 1000ml

Tris-Glycin Native Elektrophorese-Puffer (10X)

Native PAGE Elektrophorese-Puffer

Tris-Basis 29g

Glycin 144g

ddH2O bis 1000ml

MOPS SDS-Elektrophorese-Puffer (20X)

MOPS-Puffersystem Elektrophorese-Puffer

MOPS 104.6g

Tris-Basis 60.6g

SDS 10g

EDTA 3g

ddH2O bis 500ml

MES SDS-Elektrophorese-Puffer (20X)

MES-Puffersystem Elektrophorese-Puffer

MES 97.6g

Tris-Basis 60.6g

SDS 10g

EDTA 3g

ddH2O bis 500ml

Tricine SDS-Elektrophorese-Puffer (10X)

Tricine-Puffersystem Elektrophorese-Puffer

Tricine 179g

Tris-Basis 121g

SDS 10g

ddH2O bis 1000ml

Übertragungs-bezogene Puffer

Tris-Glycin Übertragung-Puffer (25X)

Western-Übertragung-Puffer

Tris-Basis 18.2g

Glycin 90g

ddH2O bis 500ml

Bis-Tis Übertragung-Puffer (20X)

Bis-Tris-System Übertragung-Puffer

Bicine 10.2g

Bis-Tris (freie Base) 13.1g

EDTA 0.75g

ddH2O bis 125ml

Blockierungspuffer und Gel-Rezepturen

5% Schlagmilch-Blockierungspuffer

Western Blot Blockierungspuffer

Schlagmilchpulver 2.5g

TBST oder PBST bis 50ml

3% BSA-Blockierungspuffer

Western Blot Blockierungspuffer

BSA 1.5g

TBST oder PBST bis 50ml

Trenngel-Rezeptur

SDS-PAGE Trenngel

Lösung 6%/10%/12%/16%/20%

50% Acrylamid/Bis 3/5/6/8/10 ml

Trenngel-Puffer 9.4 ml

10%SDS 250 ul

50% Saccharose 4 ml

ddH2O 7.8/5.8/4.8/2.7/0.75 ml

TEMED 6.25 ul

APS 625 ul

TEMED und APS zuletzt hinzufügen, und das Gel vor dem Eingießen gründlich mischen.

50% Acrylamid/Bis

Gel-Vorratslösung

Acrylamid 48.3g

Bis 1.7g

ddH2O bis 100ml

Trenngel-Puffer

Tris 30.3g

HCl pH auf 8.8 einstellen

ddH2O bis 250ml

50% Saccharose

Saccharose-Lösung

Saccharose 50g

ddH2O bis 100ml

Ammonium-Persulfat (APS) (frisch herstellen)

Gel-Polymerisations-Initiator

Ammonium-Persulfat 100mg

ddH2O bis 2ml

4% Stapelgel

SDS-PAGE Stapelgel

50% Acrylamid/Bis 1ml

Stapelgel-Puffer 4.2ml

10%SDS 125ul

ddH2O 6.3ml

TEMED 5ul

APS 1ml

TEMED und APS zuletzt hinzufügen, und das Gel vor dem Eingießen gründlich mischen.

Stapelgel-Puffer

Tris 11.4g

HCl pH auf 6.8 einstellen

ddH2O bis 250ml