Epitope Tag
Epitope-Tags sind nützlich für die Kennzeichnung und Detektion von Proteinen mittels Immunoblotting, Immunpräzipitation und Immunfärbetechniken. Aufgrund ihrer geringen Größe beeinträchtigen sie unwahrscheinlich die biochemischen Eigenschaften des markierten Proteins.
Mehrere verschiedene Epitope-Tags werden derzeit häufig genutzt und sind leicht verfügbar. Beispielsweise enthalten eine Vielzahl von Plasmiden DNA, die ein aminoterminales Tag kodiert, bestehend aus sechs Histidin-(6xHis)-Resten, gefolgt von einer erweiterten Mehrfach-Klonierungsstelle (MCS). Das 6xHis-Tag an den exprimierten rekombinanten Proteinen ermöglicht eine effiziente Kopplung an Ni2+-Affinitätsresine und Reinigung durch chromatographische Einzelschritt-Chromatographie (1). Wie bei anderen Protein-Tagsystemen (2) kann dieses Polyhistidin-Tag oft an Stellen geschnitten werden, die von Proteasen wie Thrombin und Enterokinase erkannt werden, um das Protein des Interesses zu isolieren (1). Glutathion-S-Transferase (GST) ist ein weiterer weit verbreiteter Fusionspartner, da er sowohl ein leicht detektierbares Tag als auch einen einfachen Reinigungsprozess bietet, der die biologische Funktion des Proteins des Interesses kaum beeinflusst. Zahlreiche Vektoren mit GST-Tag wurden in den letzten zehn Jahren für sowohl prokaryotische als auch eukaryotische Systeme entwickelt (3-5). Das HA-Tag, abgeleitet von einem Epitop des Influenzähämagglutinin-Proteins, wurde ebenfalls intensiv als allgemeines Epitope-Tag in Expressionsvektoren genutzt (6), während das Myc-Epitope-Tag routinemäßig zur Detektion der Expression rekombinanter Proteine in Bakterien-, Hefen-, Insekten- und Säugetierzellensystemen verwendet wird (7). Schließlich wurde das DYKDDDDK-Peptid intensiv als allgemeines Epitope-Tag in Expressionsvektoren genutzt und besteht lediglich aus acht Aminosäuren. Dieses Peptid kann als aminoterminales oder carboxyterminales Fusion mit dem Protein des Interesses exprimiert und detektiert werden (8).
Relevante Antikörper
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Referenzen
- Kroll, D.J. et al. (1993) DNA Cell Biol. 12, 441-453.
- di Guan, C. et al. (1988) Gene 67, 21-30.
- Guan, K.L. und Dixon, J.E. (1991) Anal. Biochem. 192, 262-267.
- Davies, A.H. et al. (1993) Biotechnology (N Y) 11, 933-6.
- Yu, J. et al. (1998) Mol. Cell. Biol. 18, 1379-1387.
- Field, J. et al. (1988) Mol. Cell. Biol. 8, 2159-2165.
- Munro, S. und Pelham, H.R. (1984) EMBO J. 3, 3087-3093.
- Brizzard, B. L. et al. (1994) Biotechniques 16, 730-735.
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