mIHC Multispektrale immunhistochrome TSA-Set

mIHC Multiplex-Immunohistochemie-TSA-Kit

In den Bereichen der biomedizinischen Forschung und klinischen Diagnose ist die genaue Erfassung von Proteinexpressionsstufen und räumlicher Verteilung in biologischen Proben eine wesentliche Voraussetzung für das Verständnis von Krankheitsmechanismen und die Optimierung von Behandlungsplänen. Obwohl herkömmliche Immunhistochemie-Techniken als grundlegende Detektionsmethoden dienen, stoßen sie bei der Detektion von low-abundance-Zielen oder beim simultanen Mehrziel-Analyse oft auf Herausforderungen wie schwache Signale, unzureichende Spezifität und begrenzte Markierungskapazität. Die TSA (Tyramid-Signalverstärkung)-Technologie durchbricht mit ihrem einzigartigen enzymatischen Signalverstärkungsmechanismus die Engpässe herkömmlicher Techniken. Das darauf basierende TSA-Kit verwandelt komplexe technische Prinzipien in standardisierte, einfach zu bedienende experimentelle Werkzeuge und bringt hochempfindliche, hochspezifische Mehrfarbenfluoreszenzdetektion in gewöhnliche Laboratorien. Von Paraffinschnitten über gefrorene Gewebe bis hin zu Zellproben und Organoiden spielt das TSA-Kit mit seiner breiten Probenanpassungsfähigkeit und stabilen Detektionsleistung eine unersetzbare Rolle in der räumlichen Proteomik-Forschung, Tumormikroumweltanalyse, klinisch-pathologischen Präzisionsdiagnostik und anderen Bereichen.

Unser TSA-Kit verfügt über ein vollständiges Sortiment an Produktkomponenten, einschließlich TSA-markierter Fluorophore, TSA-Dilutionspuffer, 3% H₂O₂, Blockierungslösung, Primärantikörper-Dilutionspuffer, Antikörper-Elutionspuffer, HRP-Ziege anti-Rabbit/Maus-IgG, DAPI-Färbelösung und Anti-Fluoreszenz-Ausblendungs-Medium, was den Nutzern eine One-Stop-Lösung bietet und die experimentelle Bequemlichkeit erheblich verbessert. Das Kit ist mit 7-Farben Fluoreszenzsubstraten ausgestattet, die den Wellenlängenbereich von 480–750 nm abdecken und können nach Bedarf frei kombiniert werden, um die simultane Erfassung von 7-Plex-Information auf einem einzigen Schnitt zu erreichen. Gleichzeitig sind die unterstützenden sekundären Antikörper mit Rabbit/Maus-Mehrspezies Primärantikörpern kompatibel und durchbrechen traditionelle Spezies-Einschränkungen. In Kombination mit speziell entwickeltem schonendem Antikörper-Elutionspuffer kann er Antikörper entfernen, während Antigene und Fluoreszenzsignale erhalten bleiben, was 5–7 Runden zyklischer Färbung ermöglicht, während die Gewebestrukturnintegrität erhalten bleibt, was den Probenvergleich mit Mikrowellen-Warmreparatur deutlich reduziert. Als Universalkit hat es eine breite Anwendung und kann an Paraffinschnitte, gefrorene Schnitte, Zellausstriche, Organoiden und andere Gewebeproben angepasst werden, und mit professioneller technischer Unterstützung und Qualitätssicherungssysteme können Benutzer zeitnahe und effektive Lösungen für verschiedene während der Nutzung auftretende Probleme erhalten.

Tabelle 1. Fluoreszenzfarbstoffe für Multiplex-Immunhistochemie-Detektion

Tabelle 2. TSA-Vollständiges Kit-Komponenten

Kit-Betriebsverfahren (Beispiel: Paraffinschnitte):

1. Deparaffinisierung: Tauchen Sie die Schnitte nacheinander in Xylen 1 (15 min), Xylen 2 (15 min), absolutem Ethanol 1 (5 min), absolutem Ethanol 2 (5 min), 95% Ethanol (5 min), 85% Ethanol (5 min), 75% Ethanol (5 min) und waschen Sie schließlich die Objektträger mit Wasser.

2. Antigenrückgewinnung: Verwenden Sie typischerweise 1x Citratpuffer (pH 6,0) als Rückgewinnungslösung für Hochtemperatur- und Hochdruck-Rückgewinnung. Legen Sie die Schnitte in einen Druckkochtopf, geben Sie eine geeignete Menge Rückgewinnungslösung hinzu, schließen Sie den Druckkochtopf, starten Sie das Zeitmessern 2 min nach Dampfaustritt, kühlen Sie auf Raumtemperatur ab, um die Rückgewinnung abzuschließen. [Für Ziele mit schwacher Expression kann EDTA (pH 9,0) als Rückgewinnungslösung verwendet werden. Für Gewebe, die zur Ablösung neigen wie Knochen- und Gehirngewebe, wird Mikrowellen-Rückgewinnung empfohlen, wobei die Rückgewinnungstemperatur auf ca. 80°C kontrolliert wird und 2x Citratpuffer (pH 6,0) als Rückgewinnungslösung.]

3. Endogene Enzymblockierung: Bereiten Sie eine 3% H2O2-Lösung mit reinem Wasser vor, geben Sie die Schnitte in die Lösung und inkubieren Sie bei Raumtemperatur für 20 min. Für Gewebe, die zur Ablösung neigen, können H2O2-Konzentration und Inkubationszeit entsprechend reduziert werden.

4. Blockierung: Geben Sie die Blockierungslösung tropfenweise auf das Gewebe und inkubieren Sie bei 37°C für 30 min.

5. Primärantikörper-Inkubation: Verdünnen Sie den Primärantikörper auf die geeignete Konzentration unter Verwendung des Antikörper-Dilutionspuffers, geben Sie das Antikörper tropfenweise auf das Gewebe und inkubieren Sie über Nacht bei 4°C oder für 1 h bei 37°C.

6. Sekundärantikörper-Inkubation: Geben Sie HRP-markierte sekundäre Antikörper tropfenweise auf das Gewebe und inkubieren Sie bei 37°C für 1 h.

7. TSA-Reagenz-Inkubation: Geben Sie TSA-XXX Fluoreszenzfarbstoff tropfenweise auf das Gewebe, inkubieren Sie bei 37°C für 30 min und waschen Sie dann mit PBST 3-mal, jeweils 5 min.

8. Antikörper-Elution: Geben Sie den Antikörper-Elutionspuffer tropfenweise auf das Gewebe, inkubieren Sie bei Raumtemperatur für 15 min (37°C Inkubation ist besser).

9. Wiederholen Sie Schritte 4-8 (für die Inkubation anderer TSA-XXX Fluoreszenzfarbstoffe).

10. DAPI-Kernfärbung: Geben Sie die DAPI-Arbeitslösung tropfenweise auf das Gewebe, inkubieren Sie bei Raumtemperatur für 5 min und waschen Sie dann mit PBS 3-mal, jeweils 5 min. Spin-trocknen Sie die Flüssigkeit, geben Sie das Anti-Fluoreszenz-Ausblendungs-Medium tropfenweise auf das Gewebe, bedecken Sie es mit einem Deckglas und beobachten sowie fotografieren Sie unter dem Mikroskop.

Experimentelle Hinweise

1. Monoklonale Antikörper werden als Primärantikörper bevorzugt, gefolgt von Polyklonalen Antikörpern. Für Maus-Proben sollten Sie so weit wie möglich mausabgeleitete Primärantikörper vermeiden. Wenn Maus-Primärantikörper gewählt werden, binden sekundäre Antikörper nicht nur an Primärantikörper, sondern auch an endogenes IgG im Gewebe, was zu unspezifischer Färbung führt.

2. Wenn das Gewebe leicht ablöst, kann eine Reparatur unter Verwendung eines 60°C-Wasserbad-Verfahrens durchgeführt werden.

3. Im Vergleich zu Fluoreszenz-Sekundärantikörpern hat das TSA-Kit eine höhere Empfindlichkeit und stärkere Signale. Daher muss die Konzentration des Primärantikörpers reduziert werden,

in der Regel das Dilutionsverhältnis entsprechend den im Antikörper-Instruktionen empfohlenen Dilutionsverhältnissen erhöhen, um Hintergrundfluoreszenz durch unspezifische Bindung zu reduzieren. Es wird empfohlen, eine stufenweise Konzentration des Primärantikörpers einzustellen, um die besten Ergebnisse zu erzielen.

4. Wenn die Hintergrundfluoreszenz stark ist, wird empfohlen, einen Schritt zur Gewebe-Autofluoreszenz-Quenchung hinzuzufügen.

5. Um den Antikörper-Elutionseffekt und die Fluoreszenz-Multiplex-Markierungswirkung zu gewährleisten, wird empfohlen, vor der formellen Multiplex-Markierung individuelle TSA-Einzelmarkierungs-Tests für jeden Antikörper durchzuführen und die experimentellen Bedingungen wie Antigen-Reparatur-Bedingungen und Antikörper-Sequenz für die Multiplex-Markierung auf Basis der Einzelmarkierungs-Testergebnisse zu bestimmen, nachdem bestätigt wurde, dass jeder Antikörper ideale positive Einzelmarkierungsergebnisse produzieren kann.

6. Wenn einige Antikörper hohe Titer und starke Affinität haben und nicht leicht vollständig eluiert werden können, kann die Anzahl der Elutionsschritte erhöht werden.

7. Der Antikörper-Elutionspuffer hat eine starke Fließfähigkeit. Wenn die Objektträger nicht horizontal platziert werden, kann das Reagenz aus dem Kreis herausfließen und den Elutionseffekt beeinträchtigen. Achten Sie darauf, während des Betriebs die Objektträger flach zu halten.

Tabelle 3. Verwandte Produkte

Darüber hinaus bieten wir ein vollständiges Sortiment an TSA-Markierungsservices. Wir können die beste Detektionstechnologie basierend auf Zielabundanz auswählen und den geeignetsten Wellenlängen zur Anpassung Ihrer Mehrfarben-Markierungsexperimente verwenden. 

Sechs-Markierung Sieben-Farben-Ergebnisanzeige:

Maus-Niere (Sechs-Markierung Sieben-Farben) — 10x

Maus-Gehirn (Sechs-Markierung Sieben-Farben) — 5x