1. Signalkraft
Gewöhnliche indirekte Immunfluoreszenz (IF):
Die Signalkraft ist relativ schwach, insbesondere bei der Detektion von Antigenen mit geringem Gehalt kann sie nicht empfindlich genug sein.
TSA-Mehrfarb-Immunfluoreszenz:
Aufgrund der Verstärkungseffekte des Casein-Signals ist die Signalkraft deutlich verstärkt, was die Detektion von Antigenen mit geringem Gehalt ermöglicht und die Empfindlichkeit der Detektion verbessert.
2. Prinzip
Gewöhnliche indirekte Immunfluoreszenz (IF):
Zunächst wird das Primärantikörper hinzugefügt und mit dem Antigen im Probenverband zu einem Komplex.
Anschließend wird ein fluoreszenzmarkiertes Sekundärantikörper hinzugefügt, der an das Primärantikörper bindet, und die Anwesenheit und Menge des zu detektierenden Stoffes durch Detektion des Fluoreszenzsignals bestimmt.
TSA-Mehrfarb-Immunfluoreszenz:
Basierend auf der Casein-Signalverstärkungstechnologie. Zuerst wird das Primärantikörper inkubiert und anschließend das HRP-markierte Sekundärantikörper entsprechend dem Primärantikörper an das Primärantikörper gebunden. Anschließend wird fluoreszenzmarkiertes Casein hinzugefügt, und unter der Katalyse des Peroxidases bindet das Fluorescein auf dem Casein kovalent an die umgebenden Proteine des Sekundärantikörpers, wodurch das Fluoreszenzsignal stark verstärkt wird.
Diese Technologie kann mehrere Färbungen durchführen, und nach jeder Färbung werden die Antikörper aus dem vorherigen Durchlauf durch spezifische Verarbeitung entfernt, was eine hochauflösende Mehrfarb-Markierung mehrerer Ziele in derselben Probe ermöglicht.
3. Operationelle Komplexität
Gewöhnliche indirekte Immunfluoreszenz (IF):
Die Operation ist relativ einfach und der experimentelle Prozess ist relativ kurz.
TSA-Mehrfarb-Immunfluoreszenz:
Die Operation ist relativ komplex und erfordert mehrere Färbungen sowie Schritte zum Entfernen von Antikörpern, mit hohen technischen Anforderungen und relativ langer experimenteller Zeit.
4. Auflösung
Gewöhnliche indirekte Immunfluoreszenz (IF):
Die Auflösung ist relativ gering und für einige fein strukturierte Gewebe oder Zellen kann es schwierig sein, verschiedene Antigenverteilungen klar zu unterscheiden.
TSA-Mehrfarb-Immunfluoreszenz:
• Mit hoher Auflösung kann die Lokalisation und Verteilung verschiedener Ziele in Zellen oder Geweben deutlicher dargestellt werden, was für vertiefte Forschungen zu molekularen Interaktionen und räumlichen Beziehungen innerhalb von Zellen hilfreich ist.
5. Mehrfarb-Markierungsfähigkeit
Gewöhnliche indirekte Immunfluoreszenz (IF):
Obwohl Mehrfarb-Markierungen auch möglich sind, ist die Anzahl der Mehrfarb-Markierungen in der Regel begrenzt.
TSA-Mehrfarb-Immunfluoreszenz:
Mehrere Färbungen können durchgeführt werden und durch präzise Kontrolle und Signalverstärkung kann eine größere Anzahl von Farbmarkierungen erreicht werden, was die Fähigkeit zur Mehrfarb-Markierung erheblich verbessert. Mehrere verschiedene Ziele können gleichzeitig detektiert werden, was reichhaltigere Informationen für die Untersuchung komplexer biologischer Prozesse bereitstellt.