Häufige Reagenzformulierungen für die Immunhistochemie (IHC)
10% Neutral Buffered Formalin (10% NBF)
4% Formaldehyd (w/v), 0,01 M Phosphat
Formulierung (1 L)
| Komponente | Menge |
|---|---|
| 40% Formaledehyd-Lösungsmittel | 100 mL |
| NaH₂PO₄·H₂O | 0,4 g |
| Na₂HPO₄ | 0,65 g |
| Entionisiertes Wasser | Bis zu 1 L hinzufügen |
pH:
7,2-7,4 (eingestellt mit NaOH oder HCl)
Lagerung:
1 Monat bei Raumtemperatur; bis zu 3 Monate bei 4°C
Verwendung:
Gewebeimmersion für 24 h, gefolgt von Spülwasser-Spülgang für 2 h
0,01 M Citratpuffer
10 mM Trinatriumcitrat, 1,8 mM Zitronensäure
Formulierung (500 mL)
| Komponente | Menge |
|---|---|
| 0,1 M Trinatriumcitrat | 9 mL |
| 0,1 M Zitronensäure | 41 mL |
| Entionisiertes Wasser | Bis zu 500 mL hinzufügen |
pH:
6,0 ± 0,05
Lagerung:
1 Monat bei 4°C
Verwendung:
Schnitte in das Retrieval-Box geben, erhitzen bei 121°C für 2 min (Druckkochtopf) oder 98°C für 10 min (Mikrowelle), dann natürlich auf Raumtemperatur abkühlen
3% H₂O₂-Methanol-Lösung
3% (v/v) H₂O₂
Formulierung (10 mL, frisch zubereiten)
| Komponente | Menge |
|---|---|
| 30% H₂O₂ | 1 mL |
| Methanol | 9 mL |
Verwendung:
Bei Raumtemperatur inkubieren für 10 min, spülen mit PBS 3 × 3 min
Hinweis: Dieses Reagenz sollte vor der Verwendung frisch zubereitet werden
5% Normales Serum (von derselben Spezies wie das Sekundärantikörper)
5% (v/v)
Formulierung (1 mL)
| Komponente | Menge |
|---|---|
| Normales Serum | 50 μL |
| PBS | 950 μL |
Verwendung:
Blokade bei Raumtemperatur für 30 min, ablassen ohne Waschen
PBS-BT
1% BSA, 0,05% Tween-20
Formulierung (100 mL)
| Komponente | Menge |
|---|---|
| BSA | 1 g |
| Tween-20 | 50 μL |
| PBS | Bis zu 100 mL hinzufügen |
Lagerung:
≤ 1 Woche bei 4°C; für Langzeitlagerung portionieren und bei -20°C einfrieren
Verwendung:
Sowohl Primär- als auch Sekundärantikörper mit dieser Lösung verdünnen; empfohlene Startkonzentrationen: Primärantikörper 1:100, Sekundärantikörper 1:200
DAB-H₂O₂-Arbeitslösung
0,5 mg mL⁻¹ DAB, 0,003% H₂O₂
Formulierung (5 mL, frisch zubereiten)
| Komponente | Menge |
|---|---|
| DAB-Lösungsmittel (50 mg/100 mL TB, pH 7,6, 0,22 μm filtriert) | 5 mL |
| 30% H₂O₂ | 5 μL |
Verwendung:
Auf das Deckglas des Gewebes auftragen, bei Raumtemperatur inkubieren für 1-5 min (unter dem Mikroskop beobachten), stoppen mit Spülwasser
Hinweis: Dieses Reagenz sollte vor der Verwendung frisch zubereitet werden
Harris-Hämatoxylin
0,4% Hämatoxylin (w/v), 0,08% Quecksilberoxid
Formulierung (500 mL)
| Komponente | Menge |
|---|---|
| Hämatoxylin | 2 g |
| Absoluter Ethanol | 20 mL |
| Kaliumaluminiumsulfat | 40 g |
| Entionisiertes Wasser | 480 mL |
| Quecksilberoxid | 1 g (langsam hinzufügen mit gründlichem Rühren) |
Zubereitung:
Filtrieren, 24 h stehen lassen für Reifung
Lagerung:
6 Monate bei Raumtemperatur in brauner Flasche
Verwendung:
Arbeitslösung 1:1 mit entionisiertem Wasser verdünnen, Kerne färben für 30 s-1 min, blau spülen mit Spülwasser für 5 min
Puffer
PBS (0,01 M, pH 7,4)
| Komponente | Menge (1 L) |
|---|---|
| NaCl | 8,0 g |
| KCl | 0,2 g |
| Na₂HPO₄·12H₂O | 2,9 g |
| KH₂PO₄ | 0,2 g |
| Entionisiertes Wasser | 1 L |
Zubereitung:
Autoklavieren, bei Raumtemperatur lagern
TBS-T (0,05 M Tris, 0,15 M NaCl, 0,05% Tween-20, pH 7,6)
| Komponente | Menge (1 L) |
|---|---|
| Tris-Basis | 6,05 g |
| NaCl | 8,8 g |
| Entionisiertes Wasser | 900 mL → pH auf 7,6 einstellen → bis zu 1 L hinzufügen |
| Tween-20 | 0,5 mL |
Gewebepräparat-Medium
Neutrales Balsam
Verwendung:
Nach Dehydrierung durch gestufte Ethanolserie (70% → 80% → 95% → 100% ×2, jeweils 2 min) und Entfetten mit Xylol (2 × 3 min), geeignetes Neutralbalsam auftragen und mit Deckglas abdecken
| Jeff Jeff ist ein Pathologie-Produktexperte bei EnkiLife und spezialisiert auf immunhistochemische Forschung und Produktentwicklung seit über 12 Jahren. Er hat eine hohe Einsicht in die Bedürfnisse der Benutzer und engagiert sich dafür, unseren Kunden immunhistochemische Experimente durchzuführen und wissenschaftliche Entdeckungen zu beschleunigen. |
