Pathological Research

Im Bereich der Gliomatherapie war die Entwicklung von Immuntherapien lange Zeit aufgrund unklarer Kenntnisse über das tumorische Immunschutzmilieu begrenzt. Als aggressivste Malignome im zentralen Nervensystem werden Gliomen, insbesondere GBM, seit langem als „immunschwache“ Tumoren eingestuft. Hinderliche Faktoren wie die Blut-Blut-Barriere, die die Infiltration von Immunzellen behindert, eine hohe Expression von Immuncheckpoint-Molekülen wie PD-L1 durch Tumorzellen sowie das Vorkommen von immunsuppressiven Zelltypen wie M2-Makrophagen führen zu einer klinischen Ansprechrate von weniger als 15% bei Therapien wie Immuncheckpoint-Inhibitoren.

Tertiäre Lymphoide Strukturen (TLSs) sind ektoplastische lymphoiden Ansammlungen, die innerhalb oder in der Nähe von Tumoren entstehen können und die antitumorale Immunität aktivieren. Ihr Reifendurchgang steht in engem Zusammenhang mit der immuntherapeutischen Wirksamkeit und dem Überleben der Patienten, was sie zu hoffnungsvollen Prognostikermarkern macht. Die Opal-TSA-Multiplex-Immunfluoreszenztechnologie, mit ihrer hohen Sensitivität und Flexibilität bei der Färbung, ist zur idealen Lösung geworden, um diese Herausforderungen zu überwinden.

Die Multiplex-Immunfluoreszenz kombiniert mit der Tyramide-Signal-Amplifikationstechnologie basiert auf dem Prinzip der enzymatischen Signalkaskaden-Amplifizierung. Sie hat die Grenzen traditioneller Methoden hinsichtlich Sensitivität und mehrtargeter Detektion überwunden. Die Anwendungsforschung in der Tumorpathologiediagnostik hat in den letzten Jahren eine explosive Entwicklung erlebt.

In den letzten Jahren haben Chemotherapieregime mit Immuncheckpointinhibitor-Kombinationen die Prognose einiger Patientinnen mit triple-negativeem Brustkrebs (TNBC) erheblich verbessert, doch die bestehenden Biomarker weisen offensichtliche Einschränkungen auf. Unterschiede in der Anzahl der Antikörperklonen in den kommerziellen PD-L1-Detektion-Kits führen zu ungleichmäßigen Detektionsschwellenwerten, und die Verwendung des Kriteriums "Immunzell-Positive-Rate >1%" allein kann die Art der Zellen, die PD-L1 exprimieren, nicht unterscheiden. Dies bedeutet, dass die Genauigkeit bei der Patientenscreening nur bei einer Antwortrate von 8%-20% liegt. Daher ist die Verwendung der Multiplex-Immunfluoreszenz-TSA-Technologie zur Analyse der Expressioncharakteristik von PD-L1 auf verschiedenen Immunzellen zu einer Schlüsselrichtung geworden, um die Stufenbildung und Behandlungentscheidungen bei TNBC-Patientinnen zu optimieren.

Die zelluläre Zusammensetzung, funktionelle Status und räumliche Verteilung des Tumorbefalls-Immunschutz-Mikroerregimes (TME) sind Schlüsselfaktoren für die Entstehung von Tumoren und die Wirksamkeit der Immuntherapie. Eine genaue Analyse der Eigenschaften des TME ist zu einer wichtigen Forschungsrichtung in der Onkologieforschung geworden. Allerdings weisen traditionelle Forschungsinstrumente erhebliche Einschränkungen auf: Die einfache Immunhistochemie kann nur einen einzigen Zielort nachweisen und zeigt keine interzellulären Interaktionen; die Flow-Zytometrie ermöglicht eine multiparametrische Analyse, aber sie erfordert die Trennung der Zellen und verliert wichtige räumliche Informationen; frühere multiplex fluoreszenzierende Färbungstechniken waren aufgrund niedriger Signalintensität und mangelnder Kompatibilität zwischen Antikörperarten begrenzt, was es erschwerte, sie den Anforderungen der klinischen Probenanalyse gerecht zu werden. Vor diesem Hintergrund hat eine multiplex immunfluoreszenz-Plattform auf Basis der Tyramide-Signal-Amplifikationstechnologie entstanden, die die Möglichkeit einer "panoramatischen" Analyse des TME bietet. Die Forschergruppe um Viratham Pulsawatdi A veröffentlichten eine Studie mit dem Titel "Eine robuste multiplex immunfluoreszenz- und digitalpathologische Arbeitsabläufe zur Charakterisierung des Tumorbefalls-Immunschutz-Mikroerregimes" in der Zeitschrift Molecular Oncology. In dieser Studie wurden Formalin-fixiert, Paraffin-eingewobenes Gewebe aus Darmkrebs als Untersuchungsgegenstand verwendet und basierend auf der Opal-multiplex-immunfluoreszenz-Plattform mit Tyramide-Signal-Amplifikationstechnologie ein standardisiertes Arbeitsprotokoll von der Färbung bis zur Bildanalyse entwickelt und überprüft. Dadurch wurde eine zuverlässige Methode für die präzise Charakterisierung des Tumorbefalls-Immunschutz-Mikroerregimes erstellt. Im Folgenden wird ein detaillierter Analyse von den Aspekten der technischen Essenz, experimenteller Logik, Kernergebnissen und Anwendungswert vorgestellt.

Die fluoreszierenden Farbstoffe der Enklife TSA-Kit haben hervorragende anti-fade-Eigenschaften. Es ist daher nicht notwendig, die Probe unter fluoreszente Lichtquellen zu schützen oder während des Gebrauchs in einer dunklen Umgebung zu arbeiten. Bitte vermeiden Sie jedoch eine direkte Exposition der Kit gegenüber Sonnenlicht. Beschädigte Vergrößerungsblätter können in der Regel für 6 bis 12 Monate bei 4℃ aufbewahrt werden.

Die Interaktion zwischen Krebs und dem Immunsystem des Wirts findet hauptsächlich im reaktiven Gewebe der um Tumoren herumgelegenen Stroma statt, einer Region, die als Tumor-Immunschutzmilieu (TIME) bezeichnet wird. Die bahnbrechende klinische Anwendung von Immuncheckpoint-Inhibitoren, insbesondere gezielte Therapien gegen das Programmed Death Protein 1 (PD-1, ein T-Zell-Co-Inhibitor-Rezeptor) und das Programmed Death Ligand 1 (PD-L1, auch bekannt als B7-H1/CD274), hat nicht nur die Krebsimmuntherapie in eine neue Ära geführt, sondern macht auch die funktionelle Analyse des TIME zu einem zentralen Thema sowohl in der Forschung als auch im klinischen Bereich. Die genaue Charakterisierung der zellulären Zusammensetzung des TIME, seiner funktionellen Zustände und seiner molekularen Interaktionsnetzwerke ist eine entscheidende Voraussetzung für die Identifizierung prädiktiver Biomarkern für die Immuntherapierempfiehlung. Darüber hinaus können die tiefgehende Aufklärung der pro-Krebs- und anti-Krebs-Mechanismen verschiedener Immunzellen im TIME sowie deren dynamische Zusammenbindungen mit Tumorzellen eine wichtige Grundlage für die Entwicklung neuer immuntherapeutischer Strategien bieten. Allerdings stellt die hohe Heterogenität des TIME und die Herausforderung bei der Detektion von im Gewebe seltener Immunkomponenten ernsthafte Schwierigkeiten dar, was dringend hochentwickelte, multiplex-zielgerichtete in-situ-Detektionswerkzeuge erfordert, um dieses Dilemma zu überwinden.

Im Bereich der in situ-Proteindetektion in Geweben werden Immunhistochemie (IHC), konventionelle Immunfluoreszenz (IF) und multiplexe Immunfluoreszenz (TSA) als drei am weitesten verbreitete Technologien eingesetzt. Alle drei basieren auf der spezifischen Bindung von Antigen und Antiglobulin, unterscheiden sich jedoch grundlegend in Bezug auf die Durchsatzfähigkeit bei der Detektion, die Empfindlichkeit sowie die räumliche Auflösungskapazität. Diese Faktoren bestimmen direkt den Anwendungsbereich der jeweiligen Technologien in wissenschaftlichen Forschungen und klinischen Situationen. Dieser Artikel analysiert systematisch die Unterschiede zwischen den drei Technologien aus drei Perspektiven: technischer Kern, Schlüsselleistung und anzuwendende Szenarien, und liefert präzise Referenzen für die experimentelle Gestaltung und die Auswahl der richtigen Technologie.

Unser TSA-Kit umfasst eine Vielzahl von Produktkomponenten, einschließlich TSA-markierter Fluoreszenzmittel, TSA-Dilutionsbuffer, 3% H₂O₂, Blocklösung, Primärantikörperdilutionsbuffer, Antikörperelutionbuffer, HRP-Ziegen-anti-Kaninchen/Maus-IgG, DAPI-Färbungslösung und Anti-Fluoreszenz-Qualmier-Montagemittel. Dies bietet den Nutzern eine umfassende Lösung für Experimente und erhöht die Experimentierbequemlichkeit erheblich.

Die Tyramide Signal Amplification (TSA) Technologie ist eine hochsensible in-situ-Detektionstechnik, die auf enzymatischen katalytischen Reaktionen basiert. Ihr Kernschutzmechanismus nutzt die hocheffiziente katalytische Aktivität der Hundspinnenglykophilperoxidase (HRP), um spezifisch und dicht zielgerichtete Proteine oder Nukleinsäuremoleküle in den Proben zu markieren. Als Schlüsselmethode zur Überwindung des Sensitivitätsengpasses traditioneller Detektionstechnologien kann die TSA Technologie durch ihren einzigartigen Signalamplifikationseffekt die Intensität der fluoreszenzsignalen von Zielen in verschiedenen Kernanwendungsfällen wie Immunocytochroanalyse (ICC), Immunohistochroanalyse (IHC) und in-situ-Hybridisierung (FISH) erheblich steigern. Im Vergleich zu traditionellen Detektionstechniken kann diese Technologie niedrige Anteile von Zielen effektiv erfassen – einschließlich funktionell exprimierter Proteine, seltene Zelloberflächenmarkern, Nukleinsäurefragmente mit geringer Kopienzahl und andere Zielmoleküle, die mit traditionellen Methoden schwer zu detektieren sind. Dadurch werden präzisere und umfassendere Detektionlösungen für die Lebenswissenschaftenforschung und klinische Diagnostik bereitgestellt, was auf verschiedene Probenarten wie Paraffilstücke, gefrorene Gewebe, Zellproben und Organoiden übertragen werden kann.